沙眼衣原体( Chlamydia trachomatis，Ct）是阶段比较普遍的男性生殖医院道电脑病毒性脑膜炎双球菌体之四。据生活环境卫生机构（WHO）预估，年新建Ct电脑病毒人流量达1.4亿。Ct电脑病毒后有50-70%的朋友无比较明显医学症兆，女人则70-80%。或许，就算症兆性电脑病毒和无症兆电脑病毒均会造成负作用，具体引响女人男性生殖医院软件，可能性出现了腹腔炎、异位确定怀孕和输卵管不孕不育症。不仅，Ct孩子与父母咪咪头瘤电脑病毒和HIV的电脑病毒关于 。基于Ct阶段仍没有更有效防疫针，对Ct的生物防治具体依懒于晚期筛选、早鉴别评估和早诊疗，选取极有效率的实验报告室检查鉴别评估做法对调控Ct电脑病毒具为重要的引响。
华人传染性疾病防止操纵平台传染病操纵平台于2004年制订了独一版《生殖健康医院道沙眼衣原体沾染诊断报告指导书》，去年平台会按照世界级干净组织安排指导书和最新信息的论述但是对该指导书做了修订版，第一版指导书将核酸查重做为生殖健康医院道沙眼衣原体沾染查重的主要的技巧。
沙眼衣原体实验操作室判断工艺发展方向经厉了以下三个周期中，：1、周期中，是沙眼衣原体上皮人体细胞培训，即按照上皮人体细胞培训来证实衣原体包涵体的普遍存在；第二个周期中，在培训周期中，，会相继建立联系了酶天然免疫细胞检查测量策略（EIA）、可以天然免疫细胞检查测量荧光法（DFA）和天然免疫细胞检查测量层析法（ICT），可以检查测量范例中的沙眼衣原体抗原；最后周期中，是核酸扩张工艺（NAATs）周期中，，如荧光PCR、链置換扩张工艺、转录介导等温扩张工艺等。下面则一个一个开始概诉解释。
各样本采集方式
- 尿液采集：采集清晨首次尿液或至少禁尿1h后的尿液，用无菌、无防腐剂的塑料器皿收集10-20mL前段尿液。
- 尿道拭子：男性取材前1h内不排尿，采用男性拭子插入尿道内2-3cm，以旋转方式轻轻转动并保留5-10s后取出。女性可用手指自耻骨联合后沿女性尿道走向轻轻按摩尿道，用同男性相似的方法取材。
- 宫颈拭子：采样时先用生理盐水湿润的扩阴器扩阴，无菌棉拭子清除宫颈口外面的分泌物，再将女性取材拭子插入宫颈管内1-2cm，稍用力转动，保留5-10s后取出。细胞刷采样：无菌棉拭子清洁宫颈口外表面，然后将细胞刷插入宫颈管内1-1.5cm，旋转数圈，停留数秒后取出。孕妇不应选择细胞刷采样方法。
- 肛拭子：将取材拭子插入肛管2-3cm，接触侧壁10s，从紧靠肛环边的隐窝中采集分泌物。被粪便严重污染的拭子必须丢弃，更换拭子后重新取材。
- 口咽拭子：用压舌板固定舌头，拭子越过舌根到咽后壁及扁桃体隐窝、侧壁等处，反复擦拭3-5次采集分泌物。
- 阴道拭子：对青春期前女孩，将取材拭子放置于阴道后穹窿10-15s，采集阴道分泌物。对于处女膜完整的幼女需采用男性拭子，可通过处女膜孔采集阴道样本。
- 常规阴道拭子采集可用温盐水湿润阴道窥器，轻轻按压子宫，打开窥器，使用试剂盒推荐的采样拭子放置于阴道后穹窿10-15s，采集阴道分泌物。
- 眼结膜拭子：翻开下眼睑，从眼角向中间轻轻用拭子擦拭下眼结膜表面采集分泌物。
细胞培养
一、检测原理：
沙眼衣原体企业可以生产三磷酸腺苷（ATP），需依赖性于宿体細胞具备。哪些 淋巴肿瘤細胞系用做为沙眼衣原体的易感細胞，经检查是否物品处理和抽滤使衣原体离心分离于易感細胞。在最佳的塑造要求下，沙眼衣原体以EB（原体）的类型浸入宿体細胞，被細胞膜快递包裹造成包涵体。内化的EB（始体）两极分化成代谢率活跃性、大小不大且有瓦解主义作用的RB,RB以二瓦解主义的办法增值高并发育为发育成长的子代EB，包涵体慢慢的胀大，48-72h后包涵体和宿体細胞崩裂发出出发育成长的EB，再重感染支原体易感細胞。塑造物经脱色后于电子显微镜下因而包涵体。
二、检测准备：
- 仪器设备：C02培养箱、倒置显微镜、生物安全柜、细胞培养瓶、细胞培养板、低温冰箱或液氮罐、离心机及水浴锅等。
- 细胞株：常用的敏感细胞株有McCoy、HeLa229或BHK-21细胞等。
- 检测试剂：胰酶-EDTA液、样本运输培养基、衣原体生长培养基、衣原体分离培养基、碘染色液、姬姆萨染色液及衣原体荧光单克隆抗体试剂等。
三、样本采集：
神经元膜教育激发支技好几种样板类行，以及男士尿道样板、女子宫颈的样板、十二指肠样板、口咽样板、眼结膜等样板。最后神经元膜教育激发还可灵活运用鼻咽位样板。数据采集样板过柱于长途运输教育激发基中上传在高级微波炉（2-8℃）内，24h内疫苗接种，已超24h应储放于底温微波炉（-20℃）上传。
四、检测流程：
1. 细胞复苏
将冻存的内部管安置于37℃水浴中速溶（1min内），将已复温融入的内部全部都传递至已带有10 mL RPMI1640培育液的15mL离心法法管上，1000×g，离心法法5min，弃去上清液，进入摄入足够含量培育液混匀后育苗于培育瓶中，育苗浓度值1×106/mL的样子，37℃，5%C02自然环境下培育留宿。第二日调整生长发育发育培育基通过观察生长发育发育原因，尽早传代。
2. 单层细胞制备
据实验的为的可不可以应用不一样孔的培養板开展实验，下述具体步骤以96孔培養板概述，另外孔培養板可基准表1的分配比例开展懂得调整。开始将已消毒补救0.25cm的盖玻片倒出培養板孔内，关注查看植物盖玻片是不是铺满于培養板孔中。引入适量的的体細胞及培養液，37℃、5%C02生态下培養48h，镜下查看植物体細胞的形式及比热容，待达成均匀分布遍及孔底的双层结构体細胞。
3. 样本接种与感染细胞
将保护于电冰箱的样品防止于37℃水浴中速融。在已打疫苗内部的的训练计划板孔里加入一定量样品，每样样品打疫苗2孔。的同时每板要设抗体呈阳性和阴照表孔。将打疫苗后的的训练计划板防止于22-35℃、3000×g因素下离心力1h。我们要除样品液，每孔加衣原体分离法的训练计划基0.1mL，防止于37℃、5%C02大环境下的训练计划48h，通过观察結果。试验检测孔外理：首位孔（放的盖玻片上）做好碘脱色、姬姆萨脱色或荧光单抗脱色。如首位孔阴，则第2孔做好盲传，如为抗体呈阳性，则保护菌株。
4. 染色鉴定
沙眼衣原体提升后能能用碘染色法的和姬姆萨染色法的去教学过程签别，用直观免疫检测荧光法去确证。
- 碘染色：弃去培养孔中的培养液，每孔加入0.2mL甲醇，固定感染细胞10min，弃去甲醇后加碘染色液染5~10min。在玻片上滴加1μL碘甘油封片，取出盖玻片，将细胞面朝下放在封固液上，显微镜下观察结果。
- 姬姆萨染色：培养孔弃去培养液，每孔加入0.2mL甲醇，固定感染细胞10min，弃去甲醇后加姬姆萨染色液染30min，在玻片上滴加1μL碘甘油封片，取出盖玻片，显微镜下观察结果。
- 直接免疫荧光法：感染细胞用甲醇/丙酮固定10min，弃去甲醇后加荧光标记单克隆抗体，37℃孵育30min，洗涤数次，取出盖玻片放置于载玻片上，用碱性甘油封片后在荧光显微镜下检查。
5. 效果判读
沙眼衣原体培养出来弱阳时，碘复染的镜检可看得出内部内深琥珀色包涵体;姬姆萨复染的可看得出内部内紫红白色包涵体;荧光单抗复染的可看得出苹果手机翠绿色荧光的包涵体和原体颗粒剂。 图片集
五、结果报告：
六、临床意义：
临床治疗检验模本中见沙眼衣原体繁殖适用于为检查生殖健康系统道沙眼衣原体沾染的基本原则，但塑造培养法快速度不太高，所以说临床治疗检验模本末见沙眼衣原体繁殖时可以消除自身有生殖健康系统道沙眼衣原体沾染。
七、注意事项：
- 棉拭子含有对衣原体生长有影响的物质，取材后立即将样本洗脱到运输培养基后，弃去拭子。
- 样本取材后尽快接种，24h内不能接种应放置-70℃冰箱。
- 尿液、精液样本及服过抗生素和使用阴道制剂的患者样本不宜做衣原体培养。
- 单层细胞制备时如果细胞生长过密，包涵体染色过暗，侧应降低培养中的细胞浓度。
- 细胞生长稀疏、条束化，不能成片或被污染时，则应重新复苏细胞培养。细胞传代次数超过5代不可进行培养实验。
- 胎牛血清质量对细胞生长影响很大，应选择质量合格的血清。
- 放线菌酮的浓度对于衣原体生长影响较大，应根据实际情况而定。
训练法这些年被来说是检查测量沙眼衣原体染病的「金条件」形式。致使该法检查测量特别敏主观较低（50-80%），且装备和操作步骤枝术特殊要高，模板输送需温度过低以保护沙眼衣原体的活性酶类，测试寿命长（需3-5d），模板特殊要高，仅在行业理论研究室组织开展，实用在科学合理理论研究、防菌肿瘤药物特别敏主观测试和形式学品价等。迄今为止USACDC在男童性侵和女童的生殖系统道外部链接染病的检查测量中高性价比实用该形式。
抗原检测法
沙眼衣原体抗原测试形式涉及到抗体层析法、会抗体荧光法。
一、免疫层析法
1. 检测原理：
子样本中衣原体脂多糖抗原与悬浊液金或橡胶枕头标注的衣原体单克隆表面抗原配合转变成混合物，混合物能够孔隙的作用出现转化，与调整有抗衣原体脂多糖的单克隆表面抗原配合显色。
2. 检测准备：
一定品牌标志的抗原检则实验试剂盒。
3. 样本采集：
该方法步骤检侧的合适的样版基本为宫腔样版和尿道样版。
4. 检测流程：
依据相对应的高端品牌的代表书控制就可以了，通常情况下15-60分钟的英文出最终。
5. 临床意义：
临床上范例沙眼衣原体抗原测量呈阳性能以为检测生殖医学中心道沙眼衣原体传染的意义，但该方式的过敏性较低，阴性化后果不避免的人传染沙眼衣原体。
二、直接免疫荧光法
1. 检测原理：
荧光标注的抗沙眼衣原体单克隆抗原与样表中的沙眼衣原体联系，在荧光显微镜下看不见蓝色荧光的衣原体原体或包涵体。
2. 检测准备：
- 仪器设备：荧光显微镜。
- 检测试剂盒：包括荧光标记抗沙眼衣原体单克隆抗体、已知沙眼衣原体阳性和阴性对照片、磷酸盐缓冲液、碱性甘油封片剂。
3. 样本采集：
该方案查测的为宜模板量一般的为官颈模板量和尿道模板量。
4. 检测流程：
- 样本片制备：将采集的拭子样本，均匀的涂布在玻片上，自然干燥后，滴加丙酮固定10min。
- 样本、阴性和阳性对照片各滴加荧光标记抗沙眼衣原体抗体。
- 放置于湿盒中，37℃孵育30min。
- 磷酸盐缓冲液洗涤数次，每次10min，自然干燥。
- 滴加碱性甘油后加盖玻片，荧光显微镜下观察结果。
- 结果判读：参照阴性、阳性对照片结果，观察试验样本。40x10倍镜下发现10个及以上单一针尖样绿色荧光的颗粒，判为阳性；每片可见小于10个单一针尖样绿色荧光的颗粒，判为可疑；未发现典型发绿色荧光颗粒，仅可见复染红棕色的细胞则为阴性。
5. 临床意义：
监床样板沙眼衣原体抗原论文检测弱阳可以作为为判断生殖健康道沙眼衣原体妇科病毒的根据，但该的方法的强烈性较低，呈阴性可是不排查病患妇科病毒沙眼衣原体。
6. 注意事项：
- 样本采集后立刻制备样本片，制备涂片时拭子轻轻滚动且要涂布均匀。
- 使用的玻片应清洁，防止杂质引起的假阳性染色。
- 涂片边缘的浓集染色可能是由于荧光试剂干涸引起，会导致假阳性结果。
会直接天然免疫力荧光法法支持于不同疟原虫，含有特异、便捷的好处，但是因为判读受本质方面危害，且荧光标示物不可靠，不为宜疟原虫肿瘤筛查。天然免疫力层析法也许铭感性的较低，但因操作步骤很简单，省时高效，对场景和产品规范要求低，当下在本国临床医学上仍被大面积应用软件。
核酸检测法
沙眼衣原体的核酸加测工艺通常有进行荧光配位聚合酶链的反应、链更换PCR测序技術、转录介导等温PCR测序技術、什么是染色体测序技術及应用场景核酸的POCT等。核酸加测通常完成PCR测序沙眼衣原体的7.5kb隐秘特征粒DNA、刺绣体DNA或23S rRNA、16S rRNA等靶什么是染色体来加测脑膜炎奈瑟菌体。现今最比较成熟的技術或者荧光PCR法。
在各国新冠猪疫的大主流，目前为止我国的年龄层就已对公交实时荧光PCR检则的注意事项很亲切了，临床上通过沙眼衣原体的注意事项首要也是模本抓取—核酸提炼—上机测序—最终判读，具体情况作业小细节会通过有几个商家各种生化试剂、检测仪器而有所作为各种，于是此地不需要赘述。
近几年大多数美利坚共和国FDA获得许可的淘宝商品化核酸增加的测量成品均可适用性人群于雄性的尿中和尿道拭子，女孩不官颈分秘液物、尿道分秘液物及的尿中，中国城市热力图荧光PCR的测量日起适用性人群的范本基本为雄性尿道拭子和女孩不官颈拭子，尚未能应采用微创性范本（雄性的尿中、女孩不尿道拭子及女孩不的尿中）的的测量。中国外大多数的核酸的测量免疫试剂近几年对男性生殖健康道外的范本如十二指肠和咽部拭子均未被获得许可应运，由于建立在男性生殖健康道外部结构位的测量出呈弱阳的范本时，仍可以进那步的试验报告在排除假呈弱阳。
Nelson等对安全使用有差异 女孩动物标本做NAATs加测的较准性做系统性浅析，得出结论阴部拭子( 临床药学数据采集或自采) 及宫劲拭子均远高于尿水加测毕竟的较准度.见图一为：
我们对男孩子朋友患者，Chernesky等对男孩子朋友尿道拭子和首段尿疟原虫用 NAATs 实现口碑，导致显现不管是是不是现象，尿样便可到达检验标准。 在新趋势的荧光PCR技巧认知能力，依据核酸的POCT近三年前也愈来愈越遭到私信。依据核酸的POCT最简单的方法可在封闭型平台中全自动实现产品的样品制得、去除、PCR扩增和检验，提供导致。近年有着部分企业品牌有差异我国的认正，同时各种相关网络体系之后的普及率性操作还要立即探寻。
血清学检测
血清学应力测试对泌尿生育健康道沙眼衣原健康体检查的比较敏各样和特喜欢的人较低，当前不推存运用于急慢性无高发病原因的泌尿生育健康道感染支原体的疾病诊断和筛选。在一些人中，仅有侵犯性沙眼衣原体才能致使会产生的抗原阳性技术标准以达到可检查的量，抗原阳性技术标准能实现一些年，且个体户一定的差异较少。近两天，法国的研发人员正经由发展多抗原表位合力的检查技术，来不断提高血清学抗健康体检查的敏锐度和特喜欢的人。产品现环节，新颖血清学抗健康体检查最简单的方法仍正处在探求环节。
总结
基于50%男和70%女孩子交叉传染沙眼衣原体后表达为无状交叉传染，最好对育龄期女孩子、艾滋病门珍治疗者、有高风险发生性关系举动的人等去检验。核酸增加系统含有敏主观性高、活性聊天强或者高通芯片量的的优势，可以用于生殖中心道沙眼衣原体交叉传染的检验与检验 。
沙眼衣原体检测试剂
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